在实验中所经常只能测定细锥体会的抑制情况下，这里总结了几种常见的抑制测定最初方法，期盼只能帮到你。
一细锥体会抑制的灵极高约类测定
愈演愈烈抑制的细锥体会在结构上上有一定的构造。
光学全像和一整全像
未原料细锥体会：抑制细锥体会的尺寸变小、变形，细锥体会上皮细锥体会值得提醒但用到发泡反常，细锥体会抑制中叶可见抑制小躯。贴壁细锥体会用到皱缩、变圆、松脱。
原料细锥体会：常用姬姆萨原料、瑞氏原料等。抑制细锥体会的原料质果汁、孤立，核子上皮细锥体会甲醇、原料质分割变为块锥状和抑制小躯等的现代的抑制结构上。
发射器光谱全像和总共相关联激光扫描全像
一般以细锥体会核子原料质的灵极高约类改变为基准来评审细锥体会抑制的成效情况下。
常用的 DNA 特异性原料有：HO 33342（Hoechst 33342），HO 33258（Hoechst 33258），DAPI。三种原料与 DNA 的为基础都是非软件系统的，主要为基础在 DNA 的 A-T 碱基的区。紫内外光聚焦时发射器耀眼的深蓝色发射器光谱。
Hoechst 是与 DNA 特异为基础的能活性原料，储存液躯用蒸馏水配变为 1 mg/ml 的电导率，运用于时用 PBS 氢氧化钠，自是电导率为 10 μg/ml。
DAPI 为半诱导，用于原则上固定细锥体会的原料。储存液躯用蒸馏水配变为 1 mg/ml 的电导率，运用于自是电导率一般为 10 μg/ml。
结果评审
细锥体会抑制全过程中所细锥体会核子原料质的灵极高约类改变分为三期：Ⅰ 期的细锥体会核子呈圆形波纹锥状（rippled）或呈圆形折缝样（creased），部份原料质用到果汁锥状态；Ⅱa 期细锥体会核子的原料质极整体相关联、孤立；Ⅱb 期的细锥体会核子甲醇为劈开，转化成抑制小躯（由此可知 1）。
透射电子全像推论
结果评审
抑制细锥体会尺寸变小，细锥体会质果汁。抑制Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的细锥体会核子内原料质极整体纤细，用到许多称为气穴反常（citations）的空泡结构；Ⅱa 期细锥体会核子的原料质极整体相关联、孤立；细锥体会抑制的中叶，细锥体会核子甲醇为劈开，转化成抑制小躯（由此可知 2）。
二Annexin V 法
磷脂酰底物（Phosphatidylserine, PS）但会位于细锥体会上皮细锥体会的底部，但在细锥体会抑制的20世纪，PS 可从细锥体会上皮细锥体会的底部倒转到细锥体会上皮细锥体会的凹凸不平，暴露在细锥体会内外环境中所（由此可知 3）。Annexin-V 是一种反应性为 35～36 KD 的 Ca2+ 一般来说磷脂为基础酶，能与 PS 极高亲和力特异性为基础。将 Annexin-V 顺利进行发射器光谱素（FITC、PE）或 biotin 记号，以记号了的 Annexin-V 作为发射器光谱电极，依靠流式细锥体会星象或发射器光谱全像可测定细锥体会抑制的愈演愈烈。
碘化丙啶（propidine iodide, PI）是一种核子酸原料，它不能借以值得提醒的细锥体会上皮细锥体会，但在抑制中所中叶的细锥体会和死细锥体会，PI 只能借以细锥体会上皮细锥体会而使细锥体会核子红染。因此将 Annexin-V 与 PI 匹配运用于，就可以将抑制早中叶的细锥体会以及死细锥体会的区分泛化。
最初方法
悬浮细锥体会的原料：将但会养变为和抑止抑制的悬浮细锥体会（0.5～1×106）用 PBS 浴 2 次，沙入 100 μl Binding Buffer 和 FITC 记号的 Annexin-V（20 μg/ml）10 μl，常压避光 30 min，再沙入 PI（50 μg/ml）5 μl，避光重排 5 min 后，沙入 400 μl Binding Buffer，随即用 FACScan 顺利进行流式细锥体会妖术化学合成测定（一般不超过 1 h）， 同时以不沙 AnnexinV-FITC 及 PI 的一管作为形容词相符合。
贴壁养变为的细锥体会原料：再用 0.25% 的胰酶新陈代谢，温水、原料和数据分析同悬浮细锥体会。
爬片细锥体会原料：同上，再前用发射器光谱全像和总共相关联激光扫描全像顺利进行推论。
结果
指引
1. 整个转换特技要尽比率轻柔，务必双脚吹打细锥体会。
2. 转换时提醒避光，重排再行后早日在一两星期内测定。
三线粒躯上皮细锥体会压强的测定
线粒躯在细锥体会抑制的全过程中所起着枢纽一般来说，多种细锥体会抑制诱发生物躯才可抑止完全并不相同的细锥体会愈演愈烈抑制，而线粒躯跨上皮细锥体会电位（Δψm）的降低，被认为是细锥体会抑制级联重排全过程中所最早愈演愈烈的暴力事件，它愈演愈烈在细锥体会核子抑制构造（原料质果汁、DNA 挤压）用到以后，一旦线粒躯跨上皮细锥体会电位衰弱，则细锥体会抑制不可逆转。
线粒躯跨上皮细锥体会电位的存在，使一些亲脂性Cl发射器光谱原料如 Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide（DiOC6）、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide（JC-1）、Tetramethyl rhodamine methyl ester（TMRM）等可为基础到线粒躯基质，其发射器光谱的提极高或减弱暗示线粒躯内上皮细锥体会电负性的增极高或降低。
最初方法
将但会养变为的细锥体会和抑止抑制的细锥体会沙入运用于自是电导率为 Rhodamine 123（1 mM）或自是电导率为 DiOC6（25 nM），JC-1（1 mM），TMRM（100 nM），37 °C 均衡 30 min，流式细锥体会若按测定细锥体会的发射器光谱强度。
指引
1. 始自是保持均衡染液躯中所 pH 取值的某种程度，因为 pH 取值的发生变化将受到影响上皮细锥体会电位。
2. 与原料达到均衡的细锥体会悬液躯中所如果不含有酶，他们将与部份原料为基础，降低原料的电导率，引起有假游离。
四DNA 片段化测定
细锥体会抑制时主要的生化构造是其原料质愈演愈烈果汁，原料质 DNA 在核子小躯单位之间的连接处挤压，形变为 50～300 kbp 极高约的 DNA 原野段，或 180～200 bp 整数倍的寡核子苷酸片段，在液躯躯PET上表现为梯形PET由此可知谱（DNA ladder）。
细锥体会经可执行后，换用原则上最初方法复合提纯 DNA，顺利进行琼脂糖液躯躯PET和溴化乙啶原料，在抑制细锥体会群中所可推论到的现代的 DNA ladder。如果细锥体会比率相当多，还可在复合提纯 DNA 后，用 32P-ATP 和和数核子苷酸尾端核子苷酸（TdT）记号 DNA，然后顺利进行PET和等离子自显像，推论抑制细锥体会中所 DNA ladder 的形变为。
大分子原料躯 DNA 片段的测定
细锥体会抑制的20世纪，原料躯挤压变为为 50～300 kbp 极高约的 DNA 原野段。所有超过一定反应性大小不一的双螺旋 DNA 分子在琼脂糖液躯躯中所的迁移速度并不相同。二阶 DNA 的双螺旋截面积超过液躯躯截面积时，即达到分辨力的极限。此时液躯躯不再按反应性的大小不一来筛分 DNA，DNA 像通过弯管一样，以其前端指向电势一极而通过液躯躯，这种迁移来进行称之为「爬行」。因此，细锥体会抑制20世纪转化成的 50～300 kbp 极高约的 DNA 原野段不能用都是的琼脂糖液躯躯PET来复合。
不一定换用脉冲PET技妖术可圆满地解决这一问题。这个最初方法是在液躯躯上内外沙变换的交变脉冲电势。每当电势斜向改变后，大的 DNA 分子日后滞留在爬行管中所，直至最初的电势轴向重最初定向后，才能继续向前旋转。DNA 反应性越大，这种重排所只能的间隔时间就越极高约。当 DNA 分子变换斜向的间隔时间小于极高频率周期时，DNA 就可以按其反应性大小不一分开。
DNA Ladder 测定
最初方法
翻身细锥体会（1×107）水合→细锥体会甲醇液躯→13 000 rpm ×5 min→查阅上清，沙 1% SDS 和 RnaseA（5 mg/ml）56 °C，雏鸟 2 h→酶酶 K（2.5 mg/ml）37 °C，2 h→1/10 尺寸 3 mol/l 醋酸钠和 2.5 倍尺寸的冷无水乙醇水合 DNA，4 °C 用餐→14 000 rpm×15 min→再前将水合溶解在 TE buffer 中所，沙 DNA Loading Buffer→1.2% 琼脂糖液躯躯PET，EB 原料并冲印。
结果
抑制细锥体会 DNA 不含比率的流式细锥体会若按数据分析
最初方法
查阅细锥体会→70% 冷乙醇（PBS 氢氧化钠）4 °C 固定用餐→PBS 温水，1 000 rpm × 10 min→RNase A（0.5 mg/ml）37 °C 新陈代谢 30 min→PI（50 mg/ml）原料，常压避光 15 min→FACScan 数据分析 DNA 亚色素躯的形变为及细锥体会周期的发生变化。
结果
ApoAlertTM LM-PCR Ladder Assay
优点：准确度极高，极为简单测定少比率样本，小部份抑制细锥体会。如流行病学能活许多组织测定。
五TUNEL 法
细锥体会抑制中所，原料躯 DNA 双螺旋挤压或单链挤压而转化成大比率的黏性 3'-OH 尾端，可在和数核子苷酸尾端核子苷酸（TdT）的一般来说下，将和数核子苷酸和发射器光谱素、过氧化氢酶、碱性磷酸酶或生物素形变为的衍生物记号到 DNA 的 3'-尾端，从而可顺利进行抑制细锥体会的测定，这类最初方法称为和数核子苷酸尾端核子苷酸抑制的缺口尾端记号法（terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）。
由于但会的或将要增殖的细锥体会大部份不会 DNA 的挤压，因而不会 3'-OH 形变为，相当多只能被原料。TUNEL 实际上是分子生物学与灵极高约类相为基础的数据分析最初方法，对值得提醒的单个抑制细锥体会核子或抑制小躯顺利进行原位原料，能准确地重排细锥体会抑制的现代的生物化学和结构上构造，可用于石蜡包埋许多组织切片、冰许多组织切片、养变为的细锥体会和从许多组织中所复合的细锥体会的细锥体会结构上测定，并可测定造出都是在的抑制细锥体会，因而在细锥体会抑制的数据分析中所被广泛换用。
六Caspase-3 能活性的测定
Caspase 远亲在抑制细锥体会抑制的全过程中所起着极为不可或缺的一般来说，其中所 Caspase-3 为更为重要的可执行分子，它在抑制信号传导的许多捷径中所发挥动态。Caspase-3 但会以酶原（32 KD）的方式存在于线粒体中所，在抑制的20世纪之前，它被转录，还原的 Caspase-3 由两个大核子苷酸（17 KD）和两个小核子苷酸（12 KD）组变为，甲醇具躯来说的线粒体锥体核子基团，最自是造成细锥体会抑制。但在细锥体会抑制的中叶和丧命细锥体会，Caspase-3 的能活性明显降低。
Western blot
数据分析 Procaspase-3 的还原，以及还原的 Caspase-3 及对基团羧酸（ADP-核子苷酸）聚合酶（PARP）等的甲醇。
最初方法
查阅细锥体会→PBS 温水→抽提细锥体会甲醇液躯→酶化学合成→SDS-PAGE PET→纤维素上皮细锥体会或 PVDF 上皮细锥体会分散→5% 脱脂清空，常压 1.5～2 h 或 4 °C 用餐→Caspase-3 多抗或单抗常压重排 1～2 h 或 4 °C 用餐→TBS-T（不含 0.05% Tween 20 的 TBS）浴 3 次，5～10 min/次→HRP-记号的羊抗鼠 IgG 或 AP 记号的羊抗鼠 IgG 常压重排 1～2 h→ TBS-T 浴 3 次， 5～10 min/次→ECL 显像或 NBT/BCIP 金属氧化物。
结果
发射器光谱分光镜光度若按数据分析
还原的 Caspase-3 只能特异切割 D1E2V3D4-X 基团，降解 D4-X 抑制剂键。根据这一优点，分设若按造出发射器光谱物质偶联的短抑制剂 Ac-DEVD-AMC。在总吡咯偶联时，AMC 不能被聚焦发射器光谱，短抑制剂被降解后挑造出 AMC，受限制的 AMC 才能被聚焦发射器发射器光谱。根据被囚的 AMC 发射器光谱强度的大小不一，可以测定 Caspase-3 的能活性，从而反映 Caspase-3 被还原的以往。
最初方法
翻身细锥体会但会或抑制细锥体会→PBS 温水→制取细锥体会甲醇液躯→沙 Ac-DEVD-AMC（caspase-3 发射器光谱基团）→37 °C 重排 1 h→发射器光谱分光镜光度若按（Polarstar）数据分析发射器光谱强度（聚焦光波极高约 380 nm，发射器光波极高约为 430～460 nm）。
结果
流式细锥体会妖术数据分析
最初方法
翻身细锥体会但会或抑制细锥体会→PBS 温水→沙 Ac-DEVD-AMC→37 °C 重排 1 h→UV 流式细锥体会若按数据分析 Caspase-3 阳性细锥体会数和平均值发射器光谱强度。
结果
七TFAR19 酶传达和细锥体会适配数据分析
TFAR19（PDCD5）是由本数据分析室在国际上首再报导的一个具备自己知识产权的人类最初基因，中后期的动态数据分析得造出结论，它是促进细锥体会抑制的提极高剂。依靠发射器光谱素（FITC）记号的 TFAR19 单克隆抗躯为电极，对细锥体会抑制全过程中所 TFAR19 酶的传达极高水平及适配数据分析提醒到，抑制20世纪 TFAR19 传达极高水平增极高并用到加速核子可有反常，伴随着细锥体会核子灵极高约类的发生变化，持续较极高约间隔时间，在抑制小躯中所仅仅可见。
同时我们提醒到，抑制20世纪 TFAR19 酶的核子可有早于磷脂酰底物（PS）内螺旋锥状和细锥体会核子 DNA 的片段化，提示 TFAR19 酶的核子可有是细锥体会抑制更20世纪愈演愈烈的暴力事件之一。进一步的数据分析证明，抑制20世纪 TFAR19 的核子可有具有普遍意义，完全并不相同细锥体会抑制20世纪均用到 TFAR19 极高传达和核子可有。这为数据分析细锥体会抑制20世纪所愈演愈烈的暴力事件，提供了一种最初的技妖术和基准。
TFAR19 酶的细锥体会适配数据分析
材质盐酸
FITC 记号的单克隆抗躯，pH 7.4 、0.15 mol/L PBS，3% 的羧酸甲醛，PBS-T（pH 7.4 、0.15 mol/L PBS 不含 0.2% Tween 20），胎牛胰岛素，发射器光谱细锥体会浴液躯（pH 7.4 、0.15 mol/L PBS 不含 2% 胎牛胰岛素及 0.1% NaN3），FACS 管，Tip 两头，移液躯器。
测比率星象器
高温极高水平离心机，37 °C 水浴箱，发射器光谱全像，总共相关联激光扫描全像，流式细锥体会星象。
最初方法
1. 悬浮细锥体会的原料
（1）翻身但会和抑止抑制的细锥体会（0.5～1×106），PBS 浴 2 次，1 000 rpm×10 min。
（2）3% 羧酸甲醛冰浴 10 min，PBS 浴 2 次，1 000 rpm×10 min。
（3）沙入 PBS-T 氯化钠躯，37 °C 雏鸟 15 min，PBS 浴 2 次，1 000 rpm×10 min。
（4）沙入 200 ml 胎牛胰岛素，常压重排 30 min。
（5）沙入 5 ml FITC 记号的 TFAR19 单抗（自是电导率为 1:40），4 °C 重排 30 min。
（6）发射器光谱细锥体会浴液躯浴 2 次，1 000 rpm×10 min。
将细锥体会水合滴片，发射器光谱全像及总共相关联激光全像下推论 TFAR19 在细锥体会中所的适配。同时用流式细锥体会星象化学合成测定 TFAR19 酶的平均值发射器光谱强度。
2. 贴壁细锥体会的原位原料
（1）贴壁生极高约的比值期细锥体会铺在 24 孔或 6 孔板中所（内有圣洁盖玻片），让其爬片生极高约，待极高约到 50%～80 % 满时，抑制抑止剂可执行细锥体会。
（2）将完全并不相同间隔时间点可执行的细锥体会顺利进行免疫发射器光谱原料，原料步骤同上。
（3）将原料的爬片细锥体会挑于一张滴有少比率（5 ml）的载玻片上，发射器光谱全像或总共相关联激光扫描全像推论 TFAR19 在细锥体会中所的适配。
3. 流行病学病理切片的原料、测定
4. 原代细锥体会的养变为、测定
5. 数据分析 TFAR19 酶在游离各许多组织器官的分布区及适配
TFAR19 酶的传达与流行病学结核子病
ELISA 法测定但会人和结核子病锥状态下，以及结核子病的完全并不相同时期，胰岛素中所 TFAR19 酶极高水平及其 TFAR19 自身抗躯极高水平。
材质和盐酸
1. ；也 Buffer：pH 9.6， 0.05 mol/L 氯化钠 Buffer
2. 温水液躯： pH 7.4，0.15 mol/L PBS 不含 0.05% Tween 20
3. 清空液躯： 3% BSA（用温水液躯配制）
4. 酶另加抗躯的氢氧化钠：用清空液躯氢氧化钠
5. OPD 基团 Buffer：Na2 HPO4·12 H2O 1.84 g，过氧化氢 0.51 g，DDW 100 ml
6. 金属氧化物液躯（现配另作）：基团 Buffer 10 ml，OPD 2 mg，30% H2O2 2 ml
7. 自是止液躯 2 mol/L H2SO4
8. 私营化人 TFAR19，HRP 记号的羊抗人 IgG9 ELISA 板，Tip，移液躯器，ELISA Reader（OD 490 nm），浴板机
转换步骤
1. 用；也 Buffer 氢氧化钠的私营化人 TFAR19（1 mg/ml）；也 ELISA 板，100 ml/well，37 °C 雏鸟 2 h 或 4 °C 用餐（一般 24 h 以上）。
2. 温水 Buffer 浴板三次，沙入清空液躯，200 ml/well ， 37 °C 雏鸟 2 h 或 4 °C 用餐。
3. 温水 Buffer 浴板三次，沙入完全并不相同氢氧化钠度的病人胰岛素（3 个重复孔）100 ml/well ，37 °C 雏鸟 1 h。分设；也 Buffer、温水 Buffer 、清空液躯为形容词相符合。
4. 温水 Buffer 浴板三次，沙入 1:2 500 氢氧化钠的 HRP 记号的抗人 IgG， 100 ml/well，37 °C 雏鸟 1 h。
5. 温水 Buffer 浴板三次，沙入金属氧化物液躯，100 ml/well，避光重排 10～15 min。
6. 沙入 H2SO4 自是止重排，50 ml/well。
7. ELISA Reader 读取 OD 490 光密度取值，数据分析和比较病人胰岛素和但会血 清中所 TFAR19 自身抗躯的传达极高水平。
8. Western blot 数据分析极高血压细锥体会和但会细锥体会的 TFAR 19 酶的传达极高水平。
参考文献
Brown,D.G., Sun, X.M., and Cohen, G.M.(1993) Dexamethasone-induced apoptosis involves cleage of DNA to large fragments prior to internucleosomal fragmentation. J. Biol.Chem. 268, 3037-3039
Herrmannm M, Lorenz HM, Voll R et al. A Rapid and simple method for the isolation of apoptotic DNA fragments. Nucleic Acid Res. 1994; 22:5506-5507
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撰稿： 任悠悠相关新闻
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